采用滤纸荧光斑点-薄层层析法同步测定,从浏阳河附近土壤中分离获得一株虎杖糖苷水解酶活力高的棘孢曲霉Lysgpj-10。粗酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳电洗脱二步循环法分离纯化,该酶为β-葡萄糖苷酶,为单体蛋白,分子量为27.3kDa,等电点为4.65。该酶水解虎杖苷的最适pH为5.0,最适温度为55℃,在此条件下虎杖糖苷水解酶的米氏常数Km为5 mg/mL虎杖苷,白藜芦醇转化率达98.5%。
生物转化与催化是生物技术革命的第三个浪潮,目前生物转化法制备白藜芦醇是国内外研究的热点。本作品采用滤纸荧光斑点-薄层层析法同步测定,从浏阳河附近土壤中分离获得一株虎杖糖苷水解酶活力高的菌株Lysgpj-10。经形态学和分子生物学鉴定,确定该菌为棘孢曲霉(Aspergillus.aculeatus CGMCC No.3876)。粗酶液经Amicon XM-50超滤浓缩、聚丙烯酰胺凝胶电泳电洗脱二步循环法分离纯化,该酶为β-葡萄糖苷酶,为单体蛋白,分子量为27.3kDa,等电点为4.65。酶学特性研究表明,该酶水解虎杖苷的最适pH为5.0,最适温度为55℃,在此条件下虎杖糖苷水解酶的米氏常数Km为5 mg/mL虎杖苷,白藜芦醇转化率达98.5%。制备虎杖糖苷水解酶及其复合酶制剂,开发具有自主知识产权的制备高纯度白藜芦醇的工艺路线,并用于指导类似天然产物的开发,将促进我国生物转化与催化领域的发展。
第十二届“挑战杯”作品 三等奖
2011年5月荣获我校大学生学术科技作品竞赛二等奖。
2011年5月荣获我省大学生课外学术科技作品竞赛二等奖。