目的:研究新型抗病毒肽-猪瘟病毒p14肽对猪瘟病毒的抗性研究。方法:通过SOE PCR法扩增目的基因,基因片段克隆至pET32a(+)质粒中,构建重组原核表达系统,表达出的原核蛋白纯化后,采用实时定量PCR法和间接免疫荧光法对4种黄科病毒的进行抗性研究。同时将TAT转导域同p14肽相结合。结果:通过两种方法的对比,猪瘟病毒p14肽抗猪瘟病毒效果最明显,TAT-p14串联肽抗病毒效果更强。
黄病毒科病是一种重要的引起严重疾病的动物传染病病原体,调查表明黄病毒科病毒存在一段保守蛋白:p14蛋白。这种蛋白表现出很强的抗病毒活性,也是一种发展潜力巨大的抗病毒的治疗药物。在本项目中,我们主要研究作为猪瘟病毒NS3解旋酶抑制剂的p14蛋白对猪瘟病毒的抑制作用。我们首先鉴定了p14蛋白的抗病毒活性,然后将p14蛋白同HIV-1 TAT蛋白串联结合,有利于蛋白转导进入细胞。p14蛋白在体外实验中表现出很高的抗病毒活性,我们就此猜测串联多肽在p14蛋白的基础上活性会有所提高。因此,在本项目中,我们首次将p14蛋白应用于抗猪瘟病毒的活性研究,结果证实p14蛋白的确对猪瘟病毒具有良好的抗性。在此基础上,我们又将p14蛋白同TAT转导域相结合,研究串联多肽的抗病毒性。结果证实,串联多肽比单一的p14蛋白活性有一定的提高。
第十二届“挑战杯”作品 二等奖
1.本项目立项于2009年,为我省大学生科技创新项目,2010年结题。编号为DFCS200902。
2.在《中国生物制品学》杂志上发表论文《HIV-Tat蛋白转导域的研究进展》。
3.核心内容已投SCI杂志《Journal of veterinary medical science》。