禽流感是禽类烈性传染病之一，家禽在感染H9亚型禽流感病毒，特别当伴有混合感染时，可导致并引起高死亡率及产蛋率严重下降。给家禽养殖业带来巨大损失。本作品通过建立RT-LAMP反应体系、结果可视化技术研究及临床应用等试验，成功地建立了一种H9亚型禽流感病毒的快速检测方法，极大地所淡了诊断耗时，为该病的早期诊断提供了便利。该方法具有灵敏、简单、快速、直观，无需复杂仪器的特点，合适在基层兽医中推广应用。

禽流感是禽类烈性传染病之一，家禽在感染H9亚型禽流感病毒，特别当伴有混合感染时，可导致并引起高死亡率及产蛋率严重下降。给家禽养殖业带来巨大损失。本作品通过建立RT-LAMP反应体系、结果可视化技术研究及临床应用等试验，成功地建立了一种H9亚型禽流感病毒的快速检测方法，极大地所淡了诊断耗时，为该病的早期诊断提供了便利。该方法具有灵敏、简单、快速、直观，无需复杂仪器的特点，合适在基层兽医中推广应用。
本作品经敏感性试验，确定RT-LAMP方法比RT-PCR方法敏感性的10倍。两种方法均有很好的特异性。针对109份禽咽喉拭子及泄殖腔拭子的检测结果表明，RT-LAMP方法检出率明显高于PCR方法。
与传统RT-PCR方法相比，本作品中使用的RT-LAMP方法不仅具有高敏感性，更为重要的是该方法可极大的节约检测耗时。传统RT-PCR需要将样本RNA反转录成cDNA后再应用于检测，即使在近年使用较多的一步法RT-PCR，也需在反应初期进行约30分钟的反转录步骤。而RT-LAMP只需在反应体系中加入反转录酶，即可在等温条件下一步实现样本RNA扩增，总反应仅耗时60分钟，较RT-PCR方法节省至少90分钟。
RT-LAMP检测结果的判定方法主要分为四类，一是利用凝胶电泳观察“梯形”条带的生成，二是使用实时浊度仪进行实时监测，三是肉眼观察反应管内是否产生白色浑浊，四是应用荧光显色剂显色进行判定。但前两种方法需要特殊试剂与仪器设备，而利用肉眼观察浑浊度则存在反应管透明度及人为因素等影响结果的判定。目前有较多的RT-LAMP反应使用SYBR Green I 染色剂作为荧光显色剂，但该荧光显色剂必须在反应结束后打开反应管加入，因而易造成核酸气溶胶污染，影响检测结果的准确性。
本作品中使用钙黄绿素与锰离子的混合溶液作为荧光指示剂，可通过观察颜色变化直接判定反应结果。另外，由于整个反应过程和检视过程中不需要开盖，较好地避免了因气溶胶污染而引起假阳性结果。
除上述内容外，本作品还有很大的发展空间，使其更易于基层使用。例如在此基础之上，使用FTA卡或沸水浴方法快速提取H9亚型禽流感病毒核酸，可节省样本前处理时间2-3小时，并且无需有毒有害试剂与低温高速离心机等仪器，操作简单。另外，还可对反应试剂的组成与贮存条件进行探究优化，建立一套较为完善简易的H9亚型禽流感诊断试剂盒，推广至技术、条件相对落后的基层实验室和养殖场使用。

第十二届“挑战杯”省赛作品 省赛二等奖
1、“H9亚型禽流感病毒环介导温扩增检测方法的建立与荧光显色剂的应用”一文，已于2010年6月被中国科技核心期刊《农业生物技术学报》接受，并于2011年第19卷第1期发表。

2、“H9亚型禽流感病毒快速诊断技术研究”做为全国91个参展项目之一，参加了2010年9月25日由教育部高教司主办，大连理工大学承办的“第三届全国大学生创新论坛”。